Defensa de Seminario de Facundo Matias Garrido: Identificación molecular de la proteina VAMP en el ovocito del ratón

06 de diciembre de 2017, 10:10.

Defensa de Seminario de Facundo Matias Garrido: Identificación molecular de la proteina VAMP en el ovocito del ratón

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El jueves 07 a las 09:00 hs. se realizará la defensa de Seminario de Investigación de Facundo Matias Garrido, en el Auditorio de la Facultad. El Seminario de Investigación: Identificación molecular de la proteina VAMP en el ovocito del ratón ha sido dirigido por la Dra. Marcela Michaut, y corresponde a la Licenciatura en Ciencias Básicas orientación Biología

Resumen

La exocitosis de los gránulos corticales (EGC) del ovocito, es un proceso secretorio desencadenado por la fusión del ovocito con el espermatozoide. La EGC bloquea definitivamente la polispermia y permite la continuidad del desarrollo embrionario. En esta reacción, también conocida como “reacción cortical”, se fusionan los gránulos corticales localizados en el córtex del ovocito con el oolema. Muchos estudios sugieren que la formación del complejo SNARE otorga la energía necesaria para que se produzca la fusión de biomembranas. El complejo SNARE está formado por tres tipos de proteínas: del tipo SNAP-25, Sintaxina y VAMP (acrónimo para vesicle-associated membrane protein). Hasta el momento se han identificado Sintaxina 4 y SNAP-25 en ovocitos de ratón, pero no existe reporte alguno de la presencia de VAMP.

Hipotetizando que “la maquinaria fusogénica que participa en la exocitosis de otros modelos celulares también está presente en la EGC en ovocito de ratón”, este proyecto pretende identificar y caracterizar las/s isoforma/s de VAMP involucradas en esta reacción. Para lograr este objetivo, se investigó por RT-PCR la expresión de las isoformas de VAMP; se determinó la localización intracelular de VAMP por medio de ensayos de inmunofluorescencia indirecta y, finalmente, se evaluó la presencia de VAMP por Western blot.

Los resultados indican que los transcriptos de VAMP1, VAMP2, VAMP3, VAMP7 y VAMP8 están presentes en ovocitos de ratón. Por otro lado, las imágenes de microscopía confocal muestran  que VAMP1 y VAMP3 presentan una distribución cortical mientras que VAMP2 no se detecta por esta técnica. El immunoblotting evidencia que VAMP1 y VAMP3, pero no VAMP2, se expresan en ovocitos maduros de ratón.

Este trabajo abre nuevas perspectivas al estudio de las isoformas de VAMP, ya que hacen falta ensayos funcionales para determinar su rol en la exocitosis de los gránulos corticales en ratón.

Esperamos contar con su presencia.