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Defensa de Seminario de Investigación de Fabiana Benegas

13 de noviembre de 2022, 10:55.

Defensa de Seminario de Investigación de Fabiana Benegas

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El martes 15 de noviembre a las 10:00 hs se realizará en el Auditorio de la FCEN la defensa de Seminario de Investigación de Fabiana Benegas Guerrero, denominado: "Expresión, purificación y aplicación de una versión permeable de la subunidad catalítica de la toxina botulínica B" cuya directora es la Dra. Claudia Nora Tomes y Co-Director el Dr Luis Mariano Polo.

 

Resumen 

Las SNARE forman una superfamilia de proteínas que cataliza la fusión de membranas biológicas. Las isoformas que participan en la exocitosis son la sinaptobrevina2, sintaxina1 y SNAP-25. Estas proteínas de fusión son blanco de ocho neurotoxinas segregadas por bacterias del género Clostridium. Las toxinas, siete botulínicas (BoNTs) y una tetánica, constan de una subunidad pesada, que reconoce las neuronas donde han de penetrar y una liviana, donde reside su actividad proteasa dependiente de Zn. La actividad enzimática es exquisitamente selectiva hacia una unión peptídica en una proteína SNARE: la toxina BoNT/B corta sinaptobrevina. En este corte reside el mecanismo molecular responsable del botulismo, causado por Clostridium botulinum.

Para eliminar el riesgo de trabajar con holotoxinas utilizamos la cadena liviana, que es inocua porque carece de la capacidad de unirse a las neuronas. Hemos diseñado una versión de BoNT/B (His6-TAT-BoNT/B) que penetra en sinaptosomas por transducción gracias al péptido permeable TAT del VIH. Esta proteína fue expresada heterólogamente en E. coli y purificada mediante cromatografía de afinidad. Como las SNAREs son esenciales para la exocitosis, el corte con toxinas bloquea este fenómeno. En nuestro proyecto desarrollamos esta herramienta que permea en estructuras rodeadas de membrana. Mostramos en esta tesis que His6-TAT-BoNT/B penetra dentro de sinaptosomas y cliva la sinaptobrevina2. Esta herramienta nos permitirá estudiar el papel de esta SNARE en el proceso de exocitosis en células vivas.